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人遺傳小腦共濟(jì)失調(diào)PCR檢測試劑盒產(chǎn)品特點發(fā)表時間:2020-02-20 16:11 人遺傳小腦共濟(jì)失調(diào)PCR檢測試劑盒產(chǎn)品特點: PCR引物設(shè)計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板DNA序列。因此,引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否。 要設(shè)計引物首先要找到DNA序列的保守區(qū)。同時應(yīng)預(yù)測將要擴增的片段單鏈?zhǔn)欠裥纬啥壗Y(jié)構(gòu)。如這個區(qū)域單鏈能形成二級結(jié)構(gòu),就要避開它。如這一段不能形成二級結(jié)構(gòu),那就可以在這一區(qū)域設(shè)計引物。 現(xiàn)在可以在這一保守區(qū)域里設(shè)計一對引物。一般引物長度為15-30堿基,擴增片段長度為100-600堿基對。 讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般為40%-60%。而且四種堿基的分布隨機。不要有聚嘌呤或聚嘧啶存在。否則P1引物設(shè)計的就不合理。應(yīng)重新尋找區(qū)域設(shè)計引物。 同時引物之間也不能有互補性,一般一對引物間不應(yīng)多于4個連續(xù)堿基的互補。 引物確定以后,可以對引物進(jìn)行必要的修飾,例如可以在引物的5′端加酶切位點序列;標(biāo)記生物素、熒光素、等,這對擴增的特異性影響不大。但3′端絕對不能進(jìn)行任何修飾,因為引物的延伸是從3′端開始的。這里還需提醒的是3′端不要終止于密碼子的第3位,因為密碼子第3位易發(fā)生簡并,會影響擴增的特異性與效率。 |
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